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· 上 傳 者: 上海極威生物科技有限公司
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· 所屬分類:應用方法
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· 資料簡介: β-試劑盒產品說明書(中文版) 主要用途 冰凍切片組織衰老特異性β-半乳糖苷酶檢測試劑是一種旨在以X-Gal為底物,通過切片組織內β-半乳糖苷酶在酸性條件下穩定表達,催化生成深藍色的沉積產物,從而在光學顯微鏡下觀察到藍色表達的組織細胞作為組織復制性衰老(replicative senescence)的分子特征來識別和探測衰老組織細胞的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。廣泛應用于細胞生物學研究。其適用于各種人體和動物的冰凍組織切片。產品即到即用,性能穩定,參數優化,著色敏感。 技術背景 細胞復制性衰老是細胞控制其生長潛能的保障機制。衰老細胞停滯在細胞周期的G1期,表現出細胞扁平、脹大、顆粒增多的形態特征,尤其在酸性條件下,細胞內源性β-半乳糖苷酶活性增加,而成為細胞衰老的生物學標記。 產品內容 清理液(Reagent A) 毫升 固定液(Reagent B) 毫升 酸性液(Reagent C) 毫升 稀釋液(Reagent D) 毫升 染色液(Reagent E) 毫升 產品說明書 1份 保存方式 保存染色液(Reagent E)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;稀釋液(Reagent D)和染色液(Reagent E)用鋁箔封裹,避免光照;有效保證6月 用戶自備 15毫升錐形離心管:用于配制染色工作液 恒溫培養箱:用于染色孵育 光學顯微鏡:用于觀察染色后的組織細胞 實驗步驟 實驗開始前,將試劑盒里的染色液(Reagent E)從-20℃的冰箱里取出,置入冰槽里等待溶化。然后移取xx毫升稀釋液(Reagent D)到15毫升錐形離心管,加入xx微升染色液(Reagent E),混勻后,置入37℃恒溫水槽里預熱,標記為染色工作液。然后進行下列操作: 1. 準備10片待測的厚為5至10微米的冰凍切片 2. 置于室溫下,小心加上xx微升預冷的清理液(Reagent A),鋪滿整個切片表面 3. 小心移去切片上的清理液(Reagent A) 4. 小心加上xx微升預冷的固著液(Reagent B),鋪滿整個樣品表面 5. 室溫下孵育10分鐘 6. 小心移去切片上的固著液(Reagent B) 7. 小心加上xx微升酸性液(Reagent C),鋪滿整個切片表面 8. 室溫下孵育5分鐘 9. 小心移去切片上的酸性液(Reagent C) 10. 重復實驗步驟7至9二次 11. 小心加上xx微升預熱的染色工作液,鋪滿整個切片表面 12. 在37℃濕潤培養箱里,孵育3至24小時,或組織細胞呈現藍色(注意:避免液體蒸發) 13. 小心移去切片上的染色工作液 14. 小心加上xx微升清理液(Reagent A),鋪滿整個切片表面 15. 小心移去切片上的清理液(Reagent A) 16. 放上蓋玻片或封片 17. 即刻在光學顯微鏡下觀察和計數:表達衰老特異性β- 半乳糖苷酶活性的地方,呈現藍色。 注意事項 1. 本產品為50次操作 2. 操作時,須戴手套 3. 本產品的參數:固著劑種類和濃度、pH、生色底物的選擇和濃度等達到*優化 4. 使用時,避免污染母液,否則出現絮狀沉淀,影響實驗效果 5. 染色工作液避免光照 6. 切片染色時,須避免光照 7. 染色后的樣品可以在4℃冰箱里長期保存,同樣須避免光照 8. 組織細胞β-半乳糖苷酶活性強,孵育3小時即顯示陽性;組織細胞β-半乳糖苷酶活性弱,則需要孵育24小時 9. 組織細胞染色*長孵育時間為24小時 10. 本產品染色敏感,甚至對于微弱表達的酶活性仍然顯色清晰;用戶可以根據實際情況調整孵育時間和染色工作液濃度,使染色恰到好處 11. 孵育時避免液體蒸發 12. 組織細胞呈現藍色的部位為衰老組織細胞特異性β-半乳糖苷酶活性的地方 13. 本公司提供系列細胞衰老檢測試劑產品 上海極威生物科技有限公司(Shanghai JIwei Biological Technology Co., Ltd.)成立于上海,主營產品有elisa試劑盒,大鼠elisa試劑盒,小鼠elisa試劑盒,動物血清,細胞株,標準品,生化試劑盒等。 實驗代做服務有酶聯免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務等。極威生物秉承以產品質量為根本,以市場需求為導向,以為客戶創造價值為己任的精神,致力于發展中國的科研事業。
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