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點擊次數：594 發布時間：2022/8/4 14:46:10
· 上 傳 者： 上海極威生物科技有限公司
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· 文件類型：doc
· 所屬分類：應用方法
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· 資料簡介：
活體細胞線粒體內膜功能（膜電位）熒光測定試劑是一種旨在通過高度敏感的陽離子熒光羰花青染料結合到線粒體基質，其熒光的增強或減弱說明線粒體膜電位的變化，即內膜電負性的增高或降低，來分析線粒體內膜功能的完整性的權威而經典的技術方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種線粒體制備物的功能檢測。可以被用于細胞凋亡、信號傳遞、衰老等的研究。產品嚴格無菌，即到即用，活體檢測，操作極為簡易，性能穩定。
技術背景
陽離子熒光羰花青染色劑JC-1（5,5＇,6,6＇-tetrachloro-1,1＇,3,3＇-tetraethylbenzimidazolcarbocyanine iodide）是一種對膜電位高度敏感的染色劑。它特異性地進入線粒體，分布和結合在線粒體基質上。線粒體膜電位的高低變化決定了JC-1的分布濃度。電位高，JC-1形成聚集體，而濃度高，熒光顯色為紅色或桔紅色；反之，則為綠色。熒光減弱表明線粒體內膜功能受到損害。
產品內容
染色液（Reagent A） 微升
稀釋液（Reagent B） 毫升
清理液（Reagent C） 毫升
產品說明書 1份
保存方式
保存清理液（Reagent C）在4℃冰箱里，其余的保存在－20℃冰箱里；染色液（Reagent A）避免光照；有效保證6月
用戶自備
胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（G&VS12024）：用于細胞脫離
完全細胞培養液（G&VS12052）：用于細胞脫落收集
1.5毫升離心管：用于活體細胞線粒體染色的容器
微型臺式離心機：用于細胞收集的操作
培養箱：用于染色孵育
（共聚焦）熒光顯微鏡：用于活體細胞線粒體熒光定性分析
比色皿或96孔板：用于熒光定量分析的容器
熒光分光光度儀或熒光酶標儀：用于活體細胞線粒體熒光定量分析
細胞流式儀：用于活體細胞線粒體熒光分析
實驗步驟
實驗開始前，將－20℃冰箱里的試劑盒中的染色液（Reagent A）置入冰槽里融化，稀釋液（Reagent B）放進37℃恒溫水槽里預熱。然后移出xx微升染色液（Reagent A）到新的1.5毫升離心管，加入xx微升稀釋液（Reagent B），混勻后，在冰槽里靜置，并標記為染色工作液，放在暗室里。然后進行下列操作。
一、直接法
1． 準備1個12孔細胞培養板的待測細胞，每孔鋪滿率達70％（約30萬細胞數）
2． 小心抽去細胞培養液
3． 輕輕沿著孔壁加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
4． 小心抽去xx毫升 清理液（Reagent C）
5． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液，覆蓋培養孔表面
6． 放進37℃細胞培養箱里，孵育20分鐘（注意避光）
7． 小心抽去xx微升染色工作液
8． 小心加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測前置于冰槽里）
9． 即刻在倒置熒光顯微鏡下進行觀察（單濾波或雙濾波）：
二、間接法
1． 準備1個12孔細胞培養板的待測細胞，每孔鋪滿率達70％（約30萬細胞數）
2． 小心移出細胞培養液到15毫升錐形離心管（收集懸浮細胞）
3． 加入xx毫升 清理液（Reagent C）到細胞培養孔，覆蓋培養孔表面
4． 小心移出xx毫升 清理液（Reagent C）到15毫升錐形離心管（收集洗脫細胞）
5． 加入500微升用戶自備的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，鋪滿整個培養孔表面
6． 置入37℃培養箱1分種
7． 輕輕抖動培養板，使細胞脫落，然后加入1毫升完全細胞培養液
8． 移入15毫升錐形離心管
9． 放進 臺式離心機離心5分鐘，速度為300g
10． 小心抽去上清液
11． 加入xx微升清理液（Reagent C）
12． 用200微升槍頭上下輕柔抽吸，混勻細胞顆粒群
13． 轉入到1.5毫升離心管或細胞流式儀專用測試管
14． 加入xx微升含有染色液（Reagent A） 和稀釋液（Reagent B）的染色工作液
15． 輕度渦旋震蕩2秒
16． 放進37℃細胞培養箱里，孵育20分鐘（注意避光）
17． 放進 臺式微型離心機離心5分鐘，速度為300g
18． 小心抽去上清液
19． 加入xx微升清理液（Reagent C）（注意：檢測前置于冰槽里）
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實驗代做服務有酶聯免疫ELISA檢測、生化測試、液相氣相檢測、Icp-MS測試、載體構建、RACE、全基因合成、線粒體測序、熒光定量PCR、基因克隆、定點突變、染色體步移、基因組全序列獲取、環境微生物多樣性、微生物基因組測序、微生物菌種鑒定、甲基化分析服務等。極威生物秉承以產品質量為根本，以市場需求為導向，以為客戶創造價值為己任的精神，致力于發展中國的科研事業。
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王小姐
