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· 資料簡介： SCIENTIFICS INC. U.S.A GMS50556.2 v.A 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒產品說明書（中文版） 主要用途 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑是一種旨在通過偶氮生色底物，與還原后的一價銅反應產生藍色螯合 復合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化，即采用比色法來測定樣品中總銅濃度的權威而經典的技術 方法。該技術經過精心研制、成功實驗證明的。其適用于各種動物和人體組織裂解懸液樣品中總銅的濃度 檢測。產品嚴格無菌，即到即用，操作簡捷，性能穩定，檢測敏感。 技術背景 銅為人體營養中的必需的微量元素。作為輔因子，含銅酶蛋白在鐵和兒茶酚胺（catecholamine）代謝、游 離自由基清除、血紅蛋白、彈力纖維和膠原蛋白合成等活動中起著重要作用，從而調節體內氧化還原狀態 銅在肝臟和血漿中以銅藍蛋白（caeruloplasmin）形式存在，具有鐵氧化酶抗氧化活性。銅含量過低，會導 致智力遲鈍、色素脫失、貧血、張力減退、骨壞血病變化。一旦缺失，將導致心臟病變、骨質疏松、骨關 節炎、Menkes綜合征、威爾森氏癥等。由此，銅含量檢測成為威爾森氏癥、小細胞低色素性（microcytic hypochromic anemia）貧血、骨病等的診斷指標。銅的檢測包括化學法、火焰光度法（flame photometry）、 原子吸收分光光度法等技術，但容易受到其它金屬元素的干擾，或者受限于儀器的特殊的要求。4-(3,5-溴 基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺（4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline； Di-Br-PAESA）比色法是一種穩定、簡便、準確的銅檢測技術。在弱酸性條件下，銅從復合物中解離出來； 抗壞血酸（還原型）將解離出來的二價銅離子還原成一價銅離子，一價銅離子與顯色劑DiBr-PAESA生成 藍色絡合物，在分光光度儀下通過吸光峰值的變化（波長580nm），來定量測定細胞銅的總濃度。其反應 系統為： 產品內容 清理液（Reagent A） XX 毫升 裂解液（Reagent B） XX 毫升 去干擾液（Reagent C） XX 毫升 緩沖液（Reagent D） XX 毫升 還原液（Reagent E） XX 瓶 顯色液（Reagent F） XX 毫升 標準液（Reagent G） XX 微升 產品說明書1 份 保存方式 保存在4℃冰箱里，有效保證3 月 用戶自備 15 毫升錐形離心管：用于樣品操作的容器 1.5 毫升離心管：用于樣品操作的容器 DOUNCE 勻漿器：用于組織勻化 微型臺式離心機：用于樣品制備 比色皿：用于反應的容器 分光光度儀：用于比色分析 實驗步驟 一、樣品準備 1． 手術取出動物組織，并秤重以確定500 毫克組織重量 2． （選擇步驟）放進預冷的15 毫升錐形離心管 3． （選擇步驟）加入XX 毫升清理液（Reagent A）清洗1 次 4． 移入到一個液氮凍存管 5． 即刻放進液氮罐過夜 6． 次日從液氮罐里取出，即刻（*快速度）用研磨棒碾碎組織成粉末狀（注意：切莫使組織凍融） 7． 放進一個15 毫升錐形離心管 8． 加入預冷的XX 微升裂解液（Reagent B） 9． 渦旋震蕩5 秒，充分混勻 10．即刻放進預冷的DOUNCE 勻漿器，在冰槽里用勻漿棒勻化組織（約40 下） 11．轉移到預冷的1.5 毫升離心管 12．放進4℃微型臺式離心機離心5 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415） 13．小心移取500 微升上清液到新的預冷的1.5 毫升離心管 14．移取10 微升進行蛋白定量檢測（注意：建議使用Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒－GMS30030.1） 15．加入XX 微升抗干擾液（Reagent C） 16．渦旋震蕩10 秒 17．放進4℃微型臺式離心機離心10 分鐘，速度為16000g（或13000RPM，例如eppendorf 5415） 18．小心移取上清液到新的1.5 毫升離心管 19．即刻放進－70℃保存或置于冰槽里繼續后續操作 二、測定準備 1． 準備好待測樣品，置于冰槽里備用 2． 設定好分光光度儀：波長580nm（570 至590nm 波長），并置零 3． 實驗開始前，移取XX 毫升緩沖液（Reagent D）到1 瓶還原液（Reagent E）中，混勻后，標記為反 應工作液，置于冰槽里備用，避免光照。 三、比色測定 1． 移取XX 毫升上述配制的反應工作液到新的1 毫升比色皿 2． 加入XX 微升標準液（Reagent E）或待測樣品 3． 上下傾倒數次，混勻 4． 37℃室溫下孵育5 分鐘，避免光照 5． 即刻放進分光光度儀檢測：獲得吸光讀數（OD） 6． 計算樣品銅濃度 XX 注意事項 1． 本產品為20 次操作，包括標準液 2． 本產品線性范圍為3 至400 微克/分升 3． 操作時，須戴手套 4． 避免使用EDTA 等處理樣本 5． 系統操作過程中，標準液測定只需1 次 6． 孵育反應完成后即刻進行比色測定 7． 比色測定后，比色皿須清洗徹底 8． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度 9． 用戶可以換算獲得：微克/毫克組織或蛋白；微摩爾/毫克組織或蛋白 10．微克/分升換算成微摩爾/升：微克/分升X 0.1573 11．建議用戶建立正常參考值 12．本公司提供系列銅生化檢測試劑產品 質量標準 1． 本產品經鑒定性能穩定 2． 本產品經鑒定檢測敏感 使用承諾 秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照 產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售前已作嚴格的質量鑒定，保證說明書 所述的使用效果。在貨到后10 天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公 司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致， 本公司不承擔由此造成的損失。 友情提醒 IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。 訂購信息 4 單組份訂購信息 編號名稱規格 GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50556.2A 清理液（Reagent A） 100 毫升 GMS50556.2B 標準液（Reagent B） 50 毫升 GMS50556.2C 去干擾液（Reagent C） 5 毫升 GMS50556.2D 反應液（Reagent D） 20 毫升 GMS50556.2E 標準液（Reagent E） 200 微升 試劑盒訂購信息 產品編號名稱規格 GMS50556.1 細胞銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50556.2 組織銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50556.3 體液銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50556.4 食物銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50556.5 環境銅離子濃度比色法定量檢測試劑盒20 次 GMS50557.1 細胞銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次 GMS50557.2 組織銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次 GMS50557.3 體液銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次 GMS50557.4 食物銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次 GMS50557.5 環境銅離子濃度熒光定量檢測試劑盒20 次
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王小姐
