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· 資料簡介： 本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷 使用說明書 檢測原理 試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗（ELISA）。往預先包被人白介素6（IL-6）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成*終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人白介素6（IL-6）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），計算樣品濃度。 樣品收集、處理及保存方法 1.血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。 2.血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。 3.細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4.組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。 5.保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 自備物品 1. 酶標儀（450nm） 2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL 3. 37℃恒溫箱 操作注意事項 1.試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。 2.實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。 3.預處理后的樣本無需稀釋，直接取50μL加樣即可。 4.嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。 5.所有液體組分使用前充分搖勻。 試劑盒組成名稱 96孔配置 48孔配置 備注 微孔酶標板 12孔×8條 12孔×4條 無 標準品（6管） 0.5ml/管 0.5mL/管 無 樣本稀釋液 6mL 3mL 無 檢測抗體-HRP 10mL 5mL 無 20×洗滌緩沖液 25mL 15mL 按說明書進行稀釋 底物A 6mL 3mL 無 底物B 6mL 3mL 無 終止液 6mL 3mL 無 封板膜 2張 2張 無 說明書 1份 1份 無 自封袋 1個 1個 無 注： 1.標準品濃度依次為：80、40、20、10、5、2.5pg/mL. 2.在樣本值超過標準品濃度的情況下，可用樣本稀釋液適當稀釋樣本。 試劑的準備 20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。 洗板方法 1.手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。 2.自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。 操作步驟 1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。 2.設置標準品孔、樣本孔和空白孔，空白孔什么都不加；標準品孔各加不同濃度的標準品50μL； 3.待測樣本孔加樣本50μL； 4.隨后標準品孔和樣本孔中（空白孔不加）加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。 5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。 6.所有孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。 7.所有孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。 結果判斷 繪制標準曲線：在Excel工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應OD值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。 試劑盒性能 1. 準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數R值，大于等于0.9900。 2. 靈敏度：檢測濃度小于0.1pg/mL。 3. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。 4. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。 5. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。 6. 有效期：6個月 免責聲明 1. 試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。 2. 嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。
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王小姐
