細胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測試劑盒產品說明書（中文版）-價格/說明書-GIVEI生物
保存方式
保存在－20℃冰箱里，反應液（Reagent B）、底物液（Reagent C）和標準液（Reagent E）避免光照，終止液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全；有效保證 6 月
用戶自備
1.5 毫升離心管：用于標準樣品配制和反應的容器培養箱：用于孵育反應200 微升 1 厘米光徑比色皿或黑色 96 孔板：用于熒光分析的容器熒光分光光度儀過熒光酶標儀：用于熒光分析2
實驗步驟
實驗開始，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進行下列操作。
、 測定準備
1． 準備好待測樣品（例如細胞裂解萃取液或微粒體樣品等），置于冰槽里
2． 設定好熒光分光光度儀（溫度為 37℃）：激發波長 370nm，散發波長 450nm，并置零
3． 準備好 5 個 1.5 毫升離心管，標記為 1 至 5 號管
4． 分別加入 xx 微升緩沖液（Reagent A）到每個離心管
5． 移取 xx 微升標準液（Reagent E）到 1 號管，混勻
6． 小心移取 xx 微升 1 號管稀釋的標準液（Reagent E）到 2 號管，混勻
7． 小心移取 xx 微升 2 號管稀釋的標準液（Reagent E）到 3 號管，混勻
8． 小心移取 xx 微升 3 號管稀釋的標準液（Reagent E）到 4 號管，混勻
9． 將 1 至 5 號管放進冰槽里備用，避免光照；標準管濃度見下表
管號 緩沖液（Reagent A） 標準液（Reagent E） 測定體系 標準羥基香豆素濃度
1 xx 微升 xx 微升 xx 微摩爾/升
2 xx 微升 xx 微升 1 號管 xx 微摩爾/升
3 xx 微升 xx 微升 2 號管 xx 微摩爾/升
4 xx 微升 xx 微升 3 號管 xx 微摩爾/升
5 xx 微升 空對照 0
二、 標準曲線測定
1． 移取 xx 微升緩沖液（Reagent A）到 1.5 毫升離心管
2． 加入 xx 微升反應液（Reagent B）
3． 加入 xx 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 20 微升上述配制的標準樣品
5． 上下傾倒數次，混勻
6． 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘，避免光照
7． 加入 xx 微升終止液（Reagent D），混勻
8． 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘，避免光照
9． 轉移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放進熒光分光光度儀或熒光酶標儀檢測，獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．實際熒光單位：標準樣相對熒光讀數－5 號管標準樣熒光讀數（作為空對照）
12．構建標準曲線：縱座標（Y 軸）為實際相對熒光單位（RFU）；橫座標（X 軸）為標準羥基香豆素濃度（微摩爾/升）
三、 樣品測定1． 移取 xx 微升緩沖液（Reagent A）到 1.5 毫升離心管
2． 加入 xx 微升反應液（Reagent B）
3． 加入 5 微升底物液（Reagent C）
4． 加入 xx 微升待測樣品（20 微克微粒體蛋白或 100 微克細胞裂解萃取液蛋白）（注意：樣品須清澈）
5． 上下傾倒數次，混勻
6． 在 37℃溫度下孵育 15 分鐘，避免光照
7． 加入 xx 微升終止液（Reagent D），混勻
8． 在 37℃溫度下孵育 5 分鐘，避免光照
9． 轉移到新的比色皿或黑色 96 孔板
10．即刻放進熒光分光光度儀或熒光酶標儀檢測，獲得相對熒光單位（Relative Fluorescence Unit；RFU）
11．實際熒光單位：樣品相對熒光讀數－5 號管標準樣熒光讀數（作為空對照）
12．根據標準曲線獲得樣品對應羥基香豆素濃度（微摩爾/升）
四、 計算樣品實際活性
注意事項
1． 本產品為 25 次操作，包括標準測定
2． 操作時，須戴手套
3． 系統操作過程中，標準液測定只需 1 次
4． 終止液（Reagent D）具有腐蝕性，注意操作安全
5． 樣品須澄清，至關重要（本公司提供細胞可溶性總蛋白質制備試劑盒 GMS30002.1）
6． 如果酶活性過低，可以增加孵育時間至 45 分鐘（37℃溫度下）
7． 熒光測定后，比色皿須清洗徹底
8． 建議待測樣本為微粒體，其蛋白濃度為 20 微克/100 微升；待測樣本為細胞懸液，其蛋白濃度為 100至 200 微克/100 微升（本公司提供 Bradford 蛋白質濃度定量試劑盒 GMS30030.1）
9． 如果待測樣品濃度過高或過低，可以調整樣品濃度
10．如果檢測血液樣品，建議使用體外非細胞系統細胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測試劑盒
11．細胞色素 P450 酶系單位活性定義為：在 37℃，pH 7.5 條件下，每分鐘內能夠轉化 1 納摩爾乙氧基香豆素至羥基香豆素所需的酶量作為個活性單位
12．本公司提供系列毒理學檢測試劑產品
質量標準
1． 本產品經鑒定性能穩定
2． 本產品經鑒定檢測敏感
使用承諾
秉著“信譽至上、客戶滿意、質量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優質產品和服務。用戶收到貨后，應按照產品說明書上的規定妥善保管并在有效期內使用。我們的產品在銷售已作嚴格的質量鑒定，保證說明書所述的使用效果。在貨到后 10 天內若發現確屬本產品的質量問題，請立即以書面形式（實驗報告）與本公司聯系，并將該產品退回，經檢驗確系產品質量所致，本公司負責更換產品。如系使用者錯誤操作所致，本公司不承擔由此造成的損失。
友情提醒
IF IT DOESN’T WORK， RECHECK YOUR EXPERIMENT TO SEE WHAT YOU DID WRONG。
訂購信息
單組份訂購信息
編號 名稱 規格
GMS18016.1 細胞色素 P450 酶系總活性熒光定量檢測試劑盒 25 次
GMS18016.1A 緩沖液（Reagent A） 毫升
GMS18016.1B 反應液（Reagent B） 毫升
GMS18016.1C 底物液（Reagent C） 微升
GMS18016.1D 終止液（Reagent D） 毫升
GMS18016.1E 標準液（Reagent E） 微升
試劑盒訂購信息
產品編號 名稱 規格
GMS18001 細胞/組織 S9 組分分離試劑盒 50 次
GMS18002 細胞/組織微粒體組分分離試劑盒 50 次
GMS18003 細胞色素 P450 酶體系濃度定量檢測試劑盒 20 次
GMS18016.1 細胞色素 P450 酶（CYP－ECOD）總活性熒光定量檢測試劑盒 20 次
GMS18016.2 體外非細胞系統細胞色素 P450 亞酶（CYP－ECOD）總活性熒光定量檢測試劑盒 20 次
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王小姐
