沙丁胺醇檢測試劑盒使用說明書
（酶聯免疫法）
1 原理及用途
本試劑盒采用間接競爭 ELISA 方法檢測尿樣、組織、飼料等樣本中的沙丁胺醇（Salbutamol，SAL），試劑盒由預包被偶聯抗原的酶標板、辣根酶標記物、抗體、標準品及其他配套試劑組成。檢測時，加入標準品或樣品溶液，樣本中的沙丁胺醇和酶標板上預包被偶聯抗原競爭抗沙丁胺醇抗體，加入酶標記物后，用 TMB 底物顯色，樣本吸光度值與其所含沙丁胺醇含量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣本中沙丁胺醇的殘留量。
2.1 試劑盒靈敏度：0.1ppb(ng/ml)
2.2 反應模式：25℃，30min～15min
2.3 檢測下限：
尿液、組織………………………0.1ppb
飼料………………………………1ppb
2.4 交叉反應率：
沙丁胺醇…………………………100%
鹽酸多巴酚丁胺…………………7.2%
西馬特羅…………………………0.1%
克倫特羅…………………………3.6%
萊克多巴胺………………………0.1%
腎上腺素…………………………0.1%
異丙腎上腺素……………………<1%
2.5 樣本回收率：
尿樣……………………………………90%±10%
組織……………………………………80%±10%
飼料……………………………………80%±15%
3 試劑盒組成
酶標板……………………………96 孔
標準液：各 1ml
0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb
高標準液（紅蓋）：100ppb………1ml
酶標記物（紅蓋）…………………5.5ml
抗體工作液（藍蓋）………………5.5ml
底物液 A（白蓋）……………………6ml
底物液 B（黑蓋）……………………6ml
終止液（黃蓋）………………………6ml
20X 濃縮洗滌液（白蓋）……………40ml
10X 復溶液(黃蓋)…………………50ml
說明書………………………………1 份
4 需要的器材和試劑
4.1 儀器：酶標儀、打印機、均質器 、氮氣吹干裝置、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量 0.01g） 4.2 微量移液器：單道 20µl-200µl，100µl-1000µl、多道 300µl
4.3 試劑：氫氧化鈉、乙酸乙酯、濃 HCl、乙腈、異丙醇、正己烷、無水硫酸鈉
沙丁胺醇檢測Elisa試劑盒使用說明書-價格/說明-GIVEI生物
5 樣本處理
5.1 樣本處理須知：
實驗器具必須潔凈并使用次性吸頭，以避免污染干擾實驗結果。
5.2 配液：
配液 1：1M 鹽酸溶液
稱取 8.6ml 濃 HCl 加去離子水至 100ml。
配液 2：1M NaOH 溶液
稱取 4g NaOH 加去離子水至 100ml。
配液 3：復溶液
將 10×復溶液用去離子水 10 倍稀釋，用于樣本的復溶，復溶液在 4℃環境可保存個月。 5.3 樣本處理步驟：
5.3.1 尿樣本處理方法
直接取 50µl 清亮尿樣進行測定（渾濁尿樣需要過濾或經 4000r/min 離心 5min，以得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應冷凍保存。
尿樣本稀釋倍數：1
檢測下限：0.1ppb
5.3.2 組織樣本處理方法：
稱取均質后的組織樣本 2±0.05g ，加入 6ml 復溶液，充分 振蕩 2min，室溫 4000r/min 以上離心 10min (若組織樣本中油 脂含量較高，可在振蕩后放入 85℃水浴 10min 后再離心)。取 50µl 上清液進行分析。
樣本稀釋倍數：4
檢測下限：0.4ppb
5.3.3 組織樣本處理方法二：
1） 稱取均質后的組織樣本 2±0.05g ，加入 1ml 復溶液，振 蕩混勻后加入 4ml 乙腈，振蕩混勻后加入 1ml 異丙醇，充分振 蕩 5min，室溫 4000r/min 以上離心 10min；
2） 取上清液 3ml，加入 50ul 1M NaOH，加入 7ml 乙酸乙酯， 充分振蕩 5min，室溫 4000r/min 以上離心 10min，取全部上清 在 56℃條件下氮氣或空氣流吹至完全干燥；
3） 加入 1ml 復溶液溶解干燥的殘留物，加入 1ml 正己烷混合 30s ；15℃ 4000 轉/分 以上離心 5min。
4） 取 50µl 下層液進行分析。
組織樣本稀釋倍數：1
檢測下限：0.1ppb
5.3.4 飼料樣本處理方法：
1）稱取均質后的飼料樣品 1.0±0.05g，加入 10ml 甲醇，再加 入 5g 無水硫酸鈉，振蕩 2min；室溫 4000r/min 以上離心 10min；
2）吸出離心后的上清液 1ml，于 56℃氮氣吹干，用 1 ml 復溶 液溶解干燥的殘留物，再加入 1mL 正己烷混合 30s；室溫 4000r/min 以上離心 5min。
3）取 50µl 下層進行分析。
樣本稀釋倍數：10
檢測下限：1ppb
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6 酶聯免疫試驗步驟
將所需試劑從 4℃冷藏環境中取出，置于室溫平衡 30min 以上, 洗滌液冷藏時可能會有結晶需恢復到室溫以充分溶解，每種液體試劑使用均須搖勻。取出需要數量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于 2-8℃。實驗開始，用去離子水將 20×濃縮洗滌液按 20 倍稀釋成工作洗滌液。
6.1 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做 2 孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
6.2 加樣反應：加標準品或樣本 50µl/孔到各自的微孔中，然后加酶標記物 50µl/孔，再加入 50µl/孔的抗體工作液，用蓋板膜封板，輕輕振蕩 5 混勻，25℃反應 30 分鐘。
6.3 洗滌：小心揭開蓋板膜，將孔內液體甩干，用工作洗滌液 250µl/孔充分洗滌 5 次，每次間隔 30 ，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6.4 顯色：每孔加入底物液 A 50µl，再加底物液 B 50µl，輕輕振蕩 5 混勻，25℃避光顯色 15 分鐘。
6.5 終止：每孔加入終止液 50µl，輕輕振蕩混勻，終止反應。
6.6 測吸光值：用酶標儀于 450nm 處測定每孔吸光度值（建議用雙波長 450/630nm）。測定應在終止反應后 10 分鐘內完成。
7 結果分析
7.1 百分吸光率的計算
標準液或樣本的百分吸光率等于標準液或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第個標準液（0ppb）的吸光度
值，再乘以 100%，即百分吸光度值（%）＝A×100%A0A—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值A0—0ppb 標準溶液的平均吸光度值
7.2 標準曲線的繪制與計算以標準液百分吸光率為縱坐標，對應的標準液濃度（ppb）的對數為橫坐標，繪制標準液的半對數曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中，從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度，乘以其對應的稀釋倍數即為樣本中待測物的實際濃度。若利用試劑盒業分析軟件進行計算，更便于大量樣本的準確、快速分析。（歡迎來電索取）
8 注意事項
8.1 室溫低于 25℃或試劑及樣本沒有回到室溫（25℃）會導致所有標準的 OD 值偏低。
8.2 在洗板過程中如果出現板孔干燥的情況，則會出現標準曲線不成線性，重復性不好的現象。所以洗板拍干后應立即進行下步操作。
8.3 混合要均勻，洗板要徹底，在 ELISA 分析中的再現性，很大程度上取決于洗板的致性。8.4 在所有孵育過程中，用蓋板膜封住微孔板，避免光線照射。
8.5 不要使用過了有效期的試劑盒，不要交換使用不同批號試劑盒中的試劑。
8.6 顯色液若有任何顏色表明變質，應當棄之。0 標準的吸光度值小于 0.5 個單位（A450nm< 0.5 ）時，表示試劑可能變質。
8.7 反應終止液有腐蝕性，避免接觸皮膚。
9 貯藏及保存期
儲藏條件：試劑盒于 2-8℃保存，避免冷凍。
保 質 期：該產品有效期為 1 年，生產日期見包裝盒。
原創作者：上海極威生物科技有限公司
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王小姐
